一、氮氣置換：初步降低氧氣濃度

1. 密封與準備
   • 放置必要附件（如離心機、培養皿）和干燥劑（如分子篩干燥劑）于操作室內，并放入厭氧指示劑（如美蘭指示紙）。
   • 密封手套：將乳膠手套套在觀察板法蘭圈上并扎緊，防止氣體泄漏。
   • 抽真空校驗：關閉取樣室內外門，抽真空至壓力低于0.06MPa（或500毫米汞柱），驗證氣密性。
2. 氮氣充入與排放
   • 接通氮氣進氣路，打開氮氣控制閥，使手套鼓起后關閉閥門，扎緊袋口。
   • 將氮氣緩慢釋放至操作室內，重復此過程至少2次，每次充氮前需對取樣室抽真空，并用腳踏開關開閉排氣閥，確保氧氣濃度初步降低。

二、混合氣體置換：進一步消除殘留氧氣

1. 混合氣體配比
   • 混合氣體通常由氮氣（N?，85%-90%）、氫氣（H?，5%-10%）和二氧化碳（CO?，5%）組成。
   • 氮氣作為惰性氣體提供無氧環境；氫氣與殘留氧氣在催化劑作用下反應生成水；二氧化碳維持適宜pH，模擬厭氧菌自然生存環境。
2. 充入與流量控制
   • 調換氣路，打開混合氣體閥進氣，充氣時取樣室需先抽真空，并隨時用腳踏開關開閉排氣閥。
   • 混合氣體充滿塑料袋后，關閉直通閥，打開流量計閥門，調整流量至每分鐘10ml左右。
   • 重復混合氣體置換2-3次，確保操作室內氣體含氧量降至極微量狀態（通常低于0.1%）。

三、催化除氧：徹底消除痕量氧氣

1. 催化劑作用

   • 打開操作室內的除氧催化器電源，利用鈀催化劑將密閉箱體內的氧氣與混合氣體中的氫氣催化生成水：

• 催化反應持續1小時后，觀察美蘭指示紙顏色變化。若指示紙不變色（保持無色或淺藍色），表明操作室內已達到厭氧環境（氧氣濃度低于檢測限）。

2. 滅菌與維護
   • 開啟紫外線燈對操作室進行滅菌處理，滅菌時間根據實驗要求自定（通常15-30分鐘）。
   • 連續使用厭氧培養箱時，需定期檢查和補充除氧劑（如鈀粒）和干燥劑，確保室內厭氧條件的維持。
   • 長期實驗需每天觀察厭氧指示條，若變色則需重新換氣；同時連續輸入微量混合氣體（流量約10ml/min），通過催化吸收補進的微量氧氣，保證室內厭氧狀態。

四、關鍵注意事項

1. 氣體壓力控制
   • 置換過程中需嚴格控制氣體輸入壓力（通常為0.1MPa左右），以防爆管或損壞設備。
   • 取樣室充氮置換時，若選定真空度較低，需增加置換次數以確保氧氣徹底排除。
2. 安全操作規范
   • 氫氣具有爆炸性，需控制其濃度（通常<10%）并配備安全報警裝置。
   • 調換氣瓶時需扎緊氣管，避免含氧氣體流入；真空泵需定期檢查加油，確保正常運行。
3. 環境適應性
   • 儀器應安裝于空氣清凈、溫度變化較小的地方，避免外界環境干擾。
   • 開機前需熟悉各配套儀器、儀表的使用說明，掌握正確操作方法。